Que son las pruebas bioquimicas?
Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.
Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una via metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.
Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de multiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.
De la amplia variedad de pruebas bioquímicas, nosotros en laboratorio utilizaremos 10, aplicados a 5 especies de microorganisos.
Procedimiento experimental
Inoculación de pruebas bioquímicas:apartir de un cultivo fresco de la cepa bacteriana (18 – 24 hrs.) se toma una muestra de una colonia con un asa en punta y se procede a inocular diversos medios de cultivo sólido de acuerdo al protocolo específico establecido para cada ensayo experimental.
En el caso de las pruebas bioquímicas de tipo líquido (caldo rojo de metilo y caldo lactosa rojo de fenol), estas se inoculan a partir de un cultivo bacteriano en caldo.
Incubación de las muestras: todos los tubos de ensayo inoculados seincuban a 37ºC por tiempos variables, dependiendo de la especificación de cada uno de los test bioquímicos utilizados.
Ejemplo de inoculación en medio sólido:
PRUEBAS BIOQUIMICAS CONVENCIONALES
- Agar Triple Hierro-Triple Azúcar (Agar TSI o Triple Sugar Iron).
Este medio se emplea para detectar la fermentación de lactosa, sacarosa y glucosa, con formación de ácido y gas y, también para detectar la producción de ácido sulfhídrico.
- Agar Hierro Lisina (Agar LIA o Lisyne Iron Agar).
Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra el la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo.
- Medio Movilidad-Indol-Ornitina (Medio MIO o Motility Indole Ornithine Médium).
Se emplea para determinar la movilidad, presencia de una actividad de la enzima ornitina decarboxilasa y, la producción de indol.
- Agar Citrato de Simmons (Simmons Citrate Agar).
Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del medio
- Agar SIM (Sulfide Indole Motility Medium).
Medio que permite poner en evidencia la producción de indol, ácido sulfhídrico y movilidad de las bacterias.
- Catalasa.
Esta prueba sirve para comprobar la presencia de la enzima catalasa en preparaciones de microorganismos.
- Caldo RM – VP (Methyl Red and Voges Proskauer Test).
Con estas dos pruebas se estudia qué tipo de fermentación (butilenglicólica o ácido mixta) realiza el microorganismo en estudio.
La prueba de Voges-Proskauer sirve para comprobar la capacidad de algunos organismos de producir un producto final neutro, el acetilmetilcarbinol (acetoína) a partir de la fermentación (butilenglicólica) de la glucosa. La prueba del rojo de metilo sirve para comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación (ácido mixta) de la glucosa.
- Caldo Lactosa Rojo de Fenol (CLRF o Phenol Red Lactose Broth).
Este medio permite evidenciar la presencia de bacterias fermentadoras del azúcar lactosa.
