pruebas para identificacion de microorganismos

Que son las pruebas bioquimicas?

Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.

Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una via metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.

Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de multiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.

De la amplia variedad de pruebas bioquímicas, nosotros en laboratorio utilizaremos 10, aplicados a 5 especies de microorganisos.

Procedimiento experimental

Inoculación de pruebas bioquímicas:apartir de un cultivo fresco de la cepa bacteriana (18 – 24 hrs.) se toma una muestra de una colonia con un asa en punta y se procede a inocular diversos medios de cultivo sólido de acuerdo al protocolo específico establecido para cada ensayo experimental.

En el caso de las pruebas bioquímicas de tipo líquido (caldo rojo de metilo y caldo lactosa rojo de fenol), estas se inoculan a partir de un cultivo bacteriano en caldo.

Incubación de las muestras: todos los tubos de ensayo inoculados seincuban a 37ºC por tiempos variables, dependiendo de la especificación de cada uno de los test bioquímicos utilizados.

Ejemplo de inoculación en medio sólido:

PRUEBAS BIOQUIMICAS CONVENCIONALES

• Agar Triple Hierro-Triple Azúcar (Agar TSI o Triple Sugar Iron).

Este medio se emplea para detectar la fermentación de lactosa, sacarosa y glucosa, con formación de ácido y gas y, también para detectar la producción de ácido sulfhídrico.

• Agar Hierro Lisina (Agar LIA o Lisyne Iron Agar).

Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra el la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo.

• Medio Movilidad-Indol-Ornitina (Medio MIO o Motility Indole Ornithine Médium).

Se emplea para determinar la movilidad, presencia de una actividad de la enzima ornitina decarboxilasa y, la producción de indol.

• Agar Citrato de Simmons (Simmons Citrate Agar).

Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del medio

• Agar SIM (Sulfide Indole Motility Medium).

Medio que permite poner en evidencia la producción de indol, ácido sulfhídrico y movilidad de las bacterias.

• Catalasa.

Esta prueba sirve para comprobar la presencia de la enzima catalasa en preparaciones de microorganismos.

• Caldo RM – VP (Methyl Red and Voges Proskauer Test).

Con estas dos pruebas se estudia qué tipo de fermentación (butilenglicólica o ácido mixta) realiza el microorganismo en estudio.

La prueba de Voges-Proskauer sirve para comprobar la capacidad de algunos organismos de producir un producto final neutro, el acetilmetilcarbinol (acetoína) a partir de la fermentación (butilenglicólica) de la glucosa. La prueba del rojo de metilo sirve para comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación (ácido mixta) de la glucosa.

• Caldo Lactosa Rojo de Fenol (CLRF o Phenol Red Lactose Broth).

Este medio permite evidenciar la presencia de bacterias fermentadoras del azúcar lactosa.